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活细胞免疫荧光技术－流式细胞仪标本的制备
mayitao
/发布时间:1548138603 /浏览量:27
| 实验方法原理 | 活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。 | ||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 细胞样品 试剂、试剂盒 | 兔血清第二抗体单克隆抗体FCS-RPMI1640DPBS 仪器、耗材 | 玻璃管塑料管离心机荧光显微镜
实验步骤 | 制备活性高的细胞悬液（培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用本法） 1.用10％FCSRPMll640调整细胞浓度为5×106——1×107／ml 2.取40μl细胞悬液加入预先有特异McAb（5——50μl）的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl1:20（用DPBS稀释）灭活正常兔血清。 3.4℃静置30min。 4.用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml，1000r／min×5min。 5.弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠（或兔抗鼠）荧光标记物，充分振摇。 6.4℃静置30min。 7.用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml，1000r／min×5min。 8.加适量固定液（如为FCM制备标本，一般加入1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，视细胞浓度加入100—500μl固定液） 9.FCM检测或制片后荧光显微镜下观察，（标本在试管中可保存5——7天） 注意事项 | 其他 | 来源《实验动物与动物实验方法学》
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