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活细胞免疫荧光技术-流式细胞仪标本的制备
实验方法原理 | 活细胞表面保留有较完整的抗原或受体,先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合,再用荧光标记的第二抗体结合,根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。 | ||||||||||
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实验材料 | 细胞样品 试剂、试剂盒 | 兔血清第二抗体单克隆抗体FCS-RPMI1640DPBS 仪器、耗材 | 玻璃管塑料管离心机荧光显微镜
实验步骤 | 制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用本法) 1.用10%FCSRPMll640调整细胞浓度为5×106——1×107/ml 2.取40μl细胞悬液加入预先有特异McAb(5——50μl)的小玻璃管或塑料离心管,再加50μl1:20(用DPBS稀释)灭活正常兔血清。 3.4℃静置30min。 4.用洗涤液洗涤2次,每次加洗涤液2ml,1000r/min×5min。 5.弃上清,加入50μl工作浓度的羊抗鼠(或兔抗鼠)荧光标记物,充分振摇。 6.4℃静置30min。 7.用洗涤液洗涤2次,每次加液2ml,1000r/min×5min。 8.加适量固定液(如为FCM制备标本,一般加入1ml固定液,如制片后在荧光显微镜下观察,视细胞浓度加入100—500μl固定液) 9.FCM检测或制片后荧光显微镜下观察,(标本在试管中可保存5——7天) 注意事项 | 其他 | 来源《实验动物与动物实验方法学》
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