克隆基因

2017-11-07请教高手:克隆基因的步骤

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回复:时间:2017-11-15

选择目基,并设计相应引物;用引物PCR扩增目基片段;选择合适(抗性标记、酶切位点等)克隆载体(保真扩增),并PCR片段连接入克隆载体;(般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连)连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增;肠杆菌提取质粒(即前面连接产物),酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.