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最近用无缝克隆试剂盒构建CRISPR载体完全不长菌，以前都是长菌的啊，而且成功率很高，这是怎么回事？换过别的牌子的无缝克隆试剂盒还是一样不长菌，我好崩溃啊，为什么会这样呢。一样的方法做的，比例也是按说明书上来的，为什么会不长菌呢。求高手指点。
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回复：时间：2017-05-12
kangaroo0513形成了高级结构。我也遇到过，当时连的是3Flag，就是连不上原来是这样，后来你怎么解决的呢？我做的是两个片段重组，一般情况下都不会有这种问题，现在真的是好头痛。
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