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计划以RNA为模板，设计引物进行全长CDNA片段的扩增，cDNA全长有7kb，不知道谁有没有做过类似的？我们老板说有人构建成功过，但不知道采用什么技术手段？我们之前是先以RNA为模板反转录合成第一条cDNA片段，再设计引物扩增2条片段，最后将2条片段连起来，但是构建的克隆也不成功。所以求助能否直接PCR得到全长cDNA片段，各位高人看看能否指点一二，谢谢啦！
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回复：时间：2012-05-27
群众再设计引物扩增2条片段，最后将2条片段连起来这句话什么意思？7KB比较长，建议使用TACLONE办法之前我们采用的方法是先用随机引物p出来CDNA第一条片段，再以它为模板分别设计两对引物，一对是p前一段cDNA的，另一对是后一段的，扩增前后两条片段再把拼接在载体上。我最近看到好像用RACE技术可以直接获得全长cDNA，但是对这个用不太懂，RACE技术好像都是说以mRNA为模板进行PCR，不知道总RNA可不可以做？
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回复：时间：2012-05-19
展开引用jingjae计划以RNA为模板，设计引物进行全长CDNA片段的扩增，cDNA全长有7kb，不知道谁有没有做过类似的？我们老板说有人构建成功过，但不知道采用什么技术手段？我们之前是先以RNA为模板反转录合成第一条cDNA片段，再设计引物扩增2条片段，最后将2条片段连起来，但是构建的克隆也不成功。所以求助能否直接PCR得到全长cDNA片段，各位高人看看能否指点一二，谢谢啦！......难度不小，交给我们公司来做吧
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