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回复:时间:2021-09-18
可以这个试剂盒是INVITROGEN公司的需要PCR的酶能产生A末端,然后按说明书进行操作即可,和一般TA克隆载体使用无太大差别,但是此克隆连接为TOPO连接,不需ligase
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回复:时间:2021-09-14
非常感谢你的热心帮助。我还想问你一个问题。用这个TOPO克隆试剂盒联入的PCR产物还用鉴定方向吗?如果需要鉴定方向,该用什么方法?pCDNA3.1DirectionalTOPO克隆你用过吗?这个对PCR产物的要求是什么,是不是应该加酶切位点而不是加A
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回复:时间:2021-09-14
pCDNA3.1DirectionalTOPO克隆和pcDNA3.1/V5-HisTOPOTA克隆试剂盒对PCR产物的要求是不是不一样啊?前者是要求在上游引物加上CACC进行PCR扩增,连接成功后不需要鉴定方向;而后者只要在PCR产物加A末端即可,连接后要鉴定方向.我的理解是这样的,不知道是否正确,请指正!
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回复:时间:2021-09-12
但是我有一个问题,连入PCDNA3.1的片断一般都是较大的片断,但是TOPO又是TA克隆,而高保真酶一般都不加A的,怎么来解决既可以扩增长片断,又保真,并且还加A?(Takara的LA证明保真性是不行的)
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回复:时间:2021-09-13
对于pCDNA3.1TATOPO克隆方法好像讨论得比较少哦,上传一个pcDNA3.1TATOPO克隆试剂盒说明书,看看有帮助么?pcdna3.1topota_man.pdf(291.82k)
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