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克隆试剂盒的功能
TA克隆是利用T载体3’末端带有一个T突出,而PCR扩增产物3’端带有一个A突出的特点,在DNA连接酶的作用下,将PCR扩增产物克隆到T载体上的过程,该方法是克隆PCR扩增产物的主要手段。
pUC-TsimpleTA克隆试剂盒提供了完成TA克隆的所有成分,包括T-载体,T4DNA连接酶和高效的连接缓冲液。本试剂盒中所包含的T-载体是一种高效TA克隆专用载体。这种载体是由pUC19载体改建而成,和传统T载体EcoRV切开后加T方法不同,本品通过改造pUC19,在原pUC19多克隆位点引入XcmI酶切后使其原多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基,因此有更高的重组效率。
同时它消除了pUC19载体上的多克隆酶切位点,克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时,酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率。这种载体尽管消除了LacZ基因上的多克隆酶切位点,但不影响β-半乳糖苷酶的正常表达,因此,PCR产物克隆后仍可以利用α-互补性进行蓝白斑筛选。由于这种载体是以pUC19载体为基础构建而成,所以它们具有同pUC19载体相同的功能。可以用M13通用引物进行测序(不可用T7通用引物测序,因为T7。
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