基因突变

2021-07-27【求助】RNA干扰中转染细胞的筛选

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:~)
各位老师:
我做RNA干扰实验,采用方案是shRNA表达质粒,我的问题就是质粒转染细胞后,是否需要将转染的细胞进行单克隆啊,如果说要单克隆化的话只是筛选就得化很长时间啊,望高手帮助啊?急啊
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相关回复

已帮助 0

回复:时间:2007-09-23

你做转染的目的是什么,没说清楚,别人不好判断!

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回复:时间:2007-09-24

你是不是想筛那些稳转的细胞系啊!如果是的话那就看你的质粒上是什么抗性了,很多都是NeoR基因的,也就是能抗G418,通过一定浓度的G418去筛。另外质粒上如果有GFP,看荧光有无好了。选定目的细胞,有限稀释拿到细胞单克隆并验证,这个时间的确是很长的,如果你用的细胞娇贵那就更长了,如果像3T3那样,就容易多了。

已帮助 0

回复:时间:2007-09-29

你是不是想筛那些稳转的细胞系啊!如果是的话那就看你的质粒上是什么抗性了,很多都是NeoR基因的,也就是能抗G418,通过一定浓度的G418去筛。另外质粒上如果有GFP,看荧光有无好了。选定目的细胞,有限稀释拿到细胞单克隆并验证,这个时间的确是很长的,如果你用的细胞娇贵那就更长了,如果像3T3那样,就容易多了。

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回复:时间:2007-09-27

你是不是想筛那些稳转的细胞系啊!如果是的话那就看你的质粒上是什么抗性了,很多都是NeoR基因的,也就是能抗G418,通过一定浓度的G418去筛。另外质粒上如果有GFP,看荧光有无好了。选定目的细胞,有限稀释拿到细胞单克隆并验证,这个时间的确是很长的,如果你用的细胞娇贵那就更长了,如果像3T3那样,就容易多了。