- [10-03]DNA提取试剂盒步骤最新
- [10-02]新冠病毒试剂盒背后:中国科技与发达国家的差距有多大?_经济学人 ...
- [08-07]微量血浆(血清)游离dna提取试剂盒(磁珠法)
- [07-25]实验一 基因组DNA的提取
- [08-04]PCR试题答案版
- [11-09]血清/血浆dna提取试剂盒浓度一般多少
- [09-29]Axygen miniprepare 质粒提取试剂盒说明书
- [03-30]北京五洲元业科贸中心
- [07-21]柔嫩艾美耳球虫cDNA文库的构建
相关回复
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2021-07-31
是单链cDNA,想合成双链cDNA需要另外操作:一、cDNA第二链的合成:1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物-20℃冰箱中保存,待电泳检测。其余的产物合并,混匀,然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase I buffer6ul10mM dNTP(自己配制)xuldd H2O1ulRNase H(2U/ul)10ul DNA Polymerase I(10U/ul)总体系为200ul;2. 混匀后,16℃反应2.5小时;3. 70℃灭活10分钟;4. 反应完成后,得到200ul cDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;5.取2ul二链产物,同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kb ladder,确定双链的大小范围。注:一链,二链的电泳图是smear,且二链稍比一链大一些。二、双链cDNA末端补平:1. 在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂(promega):6ul 10mM dNTP2ul T4 DNA Polymerase(8.7U/ul) 2ul BSA(10mg/ml)2. 稍微离心混匀反应物, 37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;3. 加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;4. 离心后,吸取上清于另一1.5ml eppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.注:第3,第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。PCR纯化试剂盒操作流程:1.溶液PE使用前应加入适量体积95%-100%的乙醇,混匀。2.向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB,混匀。3.加入spin column中,13000rpm离心1min。4.加入0.75ml buffer PE,13000rpm离心1min。5.13000rpm,再离心1min。6.将spin column放入一新的离心管中,加入50ul buffer EB,静置10min。7.13000rpm离心2min。8.加入30ul buffer EB,静置10min。9.13000rpm离心2min。10.加入1/10体积3M的NaAc,2.5倍体积无水乙醇,混匀,-20℃沉淀过夜。
- 1506975874DNA提取试剂盒步骤最新
- 1506932474新冠病毒试剂盒背后:中国科技与发达国家的差距有多大?_经济学人 ...
- 1628272803微量血浆(血清)游离dna提取试剂盒(磁珠法)
- 1627149603实验一 基因组DNA的提取
- 1628013601PCR试题答案版
- 1510158023血清/血浆dna提取试剂盒浓度一般多少
- 1506640240Axygen miniprepare 质粒提取试剂盒说明书
- 1238422560北京五洲元业科贸中心
- 1626804001柔嫩艾美耳球虫cDNA文库的构建
- 1510158023用于dna提取的洗涤液及其应用和dna提取试剂的制作方法
- 1627322405【求助】基因组dna文库和cdna文库的比较_实验方法_
- 1626890401 第12 页 学术科研互动社区