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第一次建CDNA文库,用的是Clontech的PCRcDNAsynthesisKit,通过LDPCR获得cDNA二链后割胶分级回收连接PMD-18T载体,最后PCR检测,得到的片段大部分集中在500bp左右,只有少量的大于1kb,请各位大虾帮忙看看是不是因为T载体不适合做cDNA文库还是因为质粒cDNA文库的容量问题,还是其它什么原因?多多赐教,不胜感激!
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回复:时间:2007-01-30
谢谢楼上的。还有一个问题请教一下,如果小片段优先插入,那载体够多,大片段也应该插入才对,而我的小片段很多,大片段很少(随机挑单菌落PCR检测)?更不可思议的是割胶回收的长片段中检测到的也是大部分是短片段,不知道是什么原因,请各位大虾帮忙啊!
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