一、材料

1.缓冲液和溶液

预杂交液（0.5mol/LpH7.2)，7%(m/V)SDS，1mmol/LEDTA(pH7.0)）

SSC(0.5X，1X，和2X)含0.1%(m/V)SDS

SSC(0.1X和0.5X）含0.1%(m/V)SDS

2.核酸和寡核苷酸

DNA或RNA探针（>2X10⁸cpm/μg）

固定于膜上的RNA

3.专用设备

滤纸（Whamian3MM或相当效果的滤纸)

沸水浴

预热到68℃的水浴

预设到杂交温度的水浴

二、方法

1.在10~20ml预杂交液中68℃温育膜2h。

2.若使用双链探针，在100℃下加热³²P标记的双链DNA5min，使之变性，然后迅速移至冰水中冷却。

3.把变性的或单链放射性标记的探针直接加到预杂交液中，在合适的温度下继续温育12~16h。

4.杂交后，将膜从塑料袋中取出，在室温下迅速转移到含有100~200ml1XSSC，0.1%SDS的塑料盒内，将盒盖好，置于水平振荡器上，温和振荡10min。

5.将膜转移至另一含有100~200ml预热至68℃、含0.1%SDS的0.5XSSC的塑料盒中。68℃下温和振荡10min。

6.重复步骤5，再洗涤至少2次，使68℃下共洗涤3次。

7.在印迹纸上晾干膜，然后让膜于-70℃下在含增感屏的暗盒内对X线片（KodakXAR-5或相应的胶片）放射自显影24~48h。此外，也可通过磷图像系统扫描得到膜上的图像。