蛋白纯化试剂盒

IgG抗体纯化实验一备选方案

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实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 准备好一根DEAE-Affi-GelBlue柱子。用5倍柱床体积的加样缓冲液平衡(7ml柱床体积/ml抗血清或腹水)。此步骤及以下各步均在4℃下操作实施。

2. 于4℃下透析样品40h,中间换2次加样缓冲液(每次换大约4L)加样上柱,速度为10ml/h。用3倍柱床体积的加样缓冲液以10ml/h的速度洗脱未结合的蛋白质。
 
3. 用洗脱缓冲液以10ml/h的速度洗脱结合的IgG组分,以10ml为一组分分部收集洗脱液,并贮存于4℃,直至合并各组分。
 
4. 每组分取30~50μl,用10%SDS-PAGE在还原条件下检测组分中是否含有IgG,合并含有IgG的组分,在4℃下透析大于40h,期间换2次缓冲液。
 
5. 用5倍柱床体积的加样缓冲液重新平衡DEAE-Affi-GelBlue柱,加少许NaN3晶体,贮存于4℃。