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免疫球蛋白纯化技术一单克隆抗体亲和层析柱纯化重组人α2a干扰素（rHuIFNα2a）
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| 实验方法原理 | 重组人α干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用的细胞因子新型药物，已在国内外广泛投入临床应用，并取得了显著的疗效。国际上对用于临床的重组干扰素的纯度要求很高，美国NIH规定必须在90％以上，因此生产者普遍采用亲和层析纯化法。我们研制了rHuIFN-α2a的McAb3F1，与CNBr活化的Sepharose4B交联制成亲和层析柱，经1年60余次较大规模试用表明具有较理想的亲和层析纯化rHuIFN-α2a的性能，达到了国内外同类McAb的水平。由于McAb3F1也能和rHuIFN-α2b结合，故极有可能亦适用于rHuIFN-α2b的亲和层析纯化。 |
|---|---|
| 实验材料 | rHuIFN-α2a |
| 试剂、试剂盒 | 盐酸 |
| 仪器、耗材 | 层析柱凝胶柱 |
| 实验步骤 | 1. rHuIFN-α2a的粗提 表达rHuIFN-α2a的工程菌用盐酸胍裂解，过DEAE凝胶柱粗提，收集活性峰。 2. 亲和层析 rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2，0.15mol/LPBS透析过夜，上样于经pH7.2，0.15mol/LPBS平衡的亲和层析柱，流速0.5ml/分，然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02，再用pH2.4，0.1mol/L甘氨酸-HC1洗脱，洗脱液立即转至pH7.2，0.15mol/LPBS中透析过夜，测定蛋白浓度、纯度和活性。 |
| 注意事项 | 一、保存方法 1.亲和柱的再生 先后用10个柱床体积、含0.5mol/LNaCl的pH8.5，0.1mol/LTris-HCl和pH4.5，0.1mol/L醋酸钠缓冲液流洗亲和柱，再用pH7.2，0.15mol/LPBS充分平衡。 2.贮存 加入1/万的叠氮钠防腐，贮存于4℃冰箱。 |
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