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2007-08-10【求助】如何利用超声波破碎来提高卵黄抗体回收率

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最近在用水稀释法加硫酸铵做卵黄抗体的初步纯化，在水稀释这步担心由于颗粒物质没有和水溶液充分混合，导致卵黄抗体回收率降低，于是将第一次水稀释后得到的上清进行离心后，又将沉淀用水重悬混合，用相同的方法再来考察是否有残留的卵黄抗体，从SDS-PAGE中可以发现，沉淀中是有残留的，而且量还不算少，于是我考虑在卵黄加入水稀释后，用超声波来混匀，使卵黄里面的颗粒物质更均匀更充分的释放在水溶液里，我的问题是应该采取怎么样的一个程序呢，即不影响我的蛋白活性也能更好的提高回收率？

大家请赐教！

相关回复

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烟袋巷100号

回复：时间：2007-08-18

没有人知道呀？自己先顶一下

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remmoon

回复：时间：2007-08-19

我做过一些关于提取卵黄抗体的试验，不知道我提出的问题对你是否有所帮助？1.为什么要使“卵黄里面的颗粒物质更均匀更充分的释放在水溶液里”？因为就我的理解，这部分颗粒物大部分为卵黄中的卵磷脂类、或者脂蛋白，如果用超声使其溶解，那么会不会使部分的脂类也溶解呢，从而影响你下一步的硫酸铵的效果？我曾经比较过水稀释法和乙醇沉淀法、辛酸硫酸铵沉淀法、聚乙二醇沉淀法的回收率，相对来说单纯的水稀释法的收率最高，但同时，其得到的样品呈微黄色，脂类去除效果最差。如果用有机溶剂沉淀，相对于盐沉淀法来说脂类去除更加有利一些2.如果真的要使用超声，最好将你的样品用冰浴冷却，而且样品超声前，最好也在4度预冷。超声程序可以超5s，停5s，工作时间分别设定为5min，10min甚至是更长来考察你的提取效果

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烟袋巷100号

回复：时间：2007-08-20

remmoon 1.我就是在实验中发现一次水稀释后会有残留,为了更好的回收,所以我想让溶液更均匀.水溶液中呈黄色是因为脂蛋白的存在,我用10%-70%的SAS分级沉淀过,发现在60%-70%时水溶液上便会浮有一层黄色油状物质,而溶液的颜色也由原来的微黄色变澄清了,而我的目的蛋白在40%内就可以沉淀完全,所以溶液的颜色影响不大,我觉得初步沉淀的时候回收率比较重要,个人觉得吧,至于纯度可以用后期的层析来达到2.谢谢你给我提供的参考程序,你用这个程序做过什么呢?是不是一般都是这个条件呢?

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remmoon

回复：时间：2007-08-21

我给你的程序是一般破碎细胞的条件，如果你的蛋白太脆弱，可以减少超声时间，延长间歇时间，可以通过实验摸索一下展开引用烟袋巷100号 wrote:remmoon 1.我就是在实验中发现一次水稀释后会有残留,为了更好的回收,所以我想让溶液更均匀.水溶液中呈黄色是因为脂蛋白的存在,我用10%-70%的SAS分级沉淀过,发现在60%-70%时水溶液上便会浮有一层黄色油状物质,而溶液的颜色也由原来的微黄色变澄清了,而我的目的蛋白在40%内就可以沉淀完全,所以溶液的颜色影响不大,我觉得初步沉淀的时候回收率比较重要,个人觉得吧,至于纯度可以用后期的层析来达到2.谢谢你给我提供的参考程序,你用这个程序做过什么呢?是不是一般都是这个条件呢?......

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烟袋巷100号

回复：时间：2007-08-21

ok,谢谢，最近太忙，实验要只有滞后了

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