2021-07-24大肠杆菌怎么破碎最好呀？

按1ml菌液×OD600加入100μl的比例加入2×上样缓冲液，混匀，-20℃保存或直接上样,一般上10ul就可以了超声一般200w，10s，15s间隔，30次1ml离心后重悬的菌液这样超30次即可，若是20ml超90次你加溶菌酶后注意不要超声过头，否则菌液会炭化你说的一片蓝是不是上样太多了？

一片蓝可能是超声过度，溶菌太厉害了，离心的时候没有离干净最好先了解一下目标蛋白是周质还是胞质表达的，如果是周质，可以不用超声，用高渗就可以抽提。一般做超声的时候，要结合镜检结果来判断是否超声完全，可先做一个超声强度和次数的实验。

谢谢大家，我试着将超声时间缩短次数增加后，效果好的多了