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我想用大肠杆菌来表达一种磷脂酶，目前我用的方法是先加溶菌酶和保护剂，15－20min后，再用超声波1min，可是跑出的带很不清晰，看上去就是一片蓝而已，好像是有所降解吧。不知是哪里做的不好了
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回复：时间：2005-04-07
按1ml菌液×OD600加入100μl的比例加入2×上样缓冲液，混匀，-20℃保存或直接上样,一般上10ul就可以了超声一般200w，10s，15s间隔，30次1ml离心后重悬的菌液这样超30次即可，若是20ml超90次你加溶菌酶后注意不要超声过头，否则菌液会炭化你说的一片蓝是不是上样太多了？
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回复：时间：2005-04-04
一片蓝可能是超声过度，溶菌太厉害了，离心的时候没有离干净最好先了解一下目标蛋白是周质还是胞质表达的，如果是周质，可以不用超声，用高渗就可以抽提。一般做超声的时候，要结合镜检结果来判断是否超声完全，可先做一个超声强度和次数的实验。
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