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Hanging drop aggregation assay
DescriptionThisassayisusedfortheaggregationpropertyofcancercells.Itisaverycriticalparameterformeasurementofcellmetastasis.Factorsthatcriticallyaffecttumorcellmetastasisareaggregationandadhesivepropertiesofthecells.Thispropertyisusuallyalteredinthetumorcells.Procedure1.TrypsinizethecellsinthepresenceofEDTA,washtwiceinPBS,andresUSPendat2.5x105cells/mlintheappropriatemediumcontaining10%FBS.2.Pipettedrops(20μleach)ofmedium,containing5000cells/drop,ontotheinnersurfaceofthelidofaPetridish.3.ThenplacethelidonthePetridishsothatthedropswillbehangingfromthelidwiththecellssuspendedwithinthem.4.Toeliminateevaporation,place8mlofserum-freeculturemediuminthebottomofthePetridish.5.Incubatecellsovernightat37°C.6.InvertthelidofthePetridishandtakethephotographusinginvertedtissueculturemicroscopeatX40magnification.
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