1. Putcryovialstraightfromstorageandfloatinthe37篊waterbath-cautionshouldbetakenasonrareoccasionsvialscanexplodewhenheatedupduetotrappedliquidnitrogen.
2. Inahood,usingsteriletechnique,transfer10mlsofprewarmedFCSsupplementedmediaintosterilecentrifugetubes.
3. Assoonascellsarewarmtakethevialfromthewaterbathandcleantheoutsidethoroughlywith70%ethanol.
4. Pipettecellsfromthecryovialandslowlydropbydroptransfertotheprepared10mlsofmedia.
5. Spinimmediatelyat1000rpmfor5mins,lowbrakeinordertopelletthecells.
6. Immediatelyremovethemediafrompellet.
7. ResUSPendcellsinafresh10mlsofmediaandtransfertoaflaskandgrowinincubator.
8. Thefollowingdaytakeoffmedia,washwithwarmsterilePBSandaddmoremedia,leavetoincubateforafurther24hours.
9. Checkconfluenceofcellsunderthemicroscopeandsplitbytrypsinationifnecessary.

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