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稳转细胞株(系)构建方法

mayitao /发布时间:1629307803 /浏览量:178

服务名称：	稳转细胞系构建
提供商：	合研生物

稳定转染：
    转染的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对
靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，
从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。
筛选稳定细胞系有两种方法：
    1）转染质粒后，筛选获得稳转细胞系；
   2）慢病毒感染筛选稳定细胞系。慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效，是目前主流的稳定
细胞系筛选方法。
应用：
    1）基因过表达服务
   2）shRNA干扰服务
   3）miRNA过表达
   4）任意非编码基因的过表达
收样注意事项：
    1、细胞名称、来源、培养条件
    2、稳转细胞系的类型（过表达/干扰/其他）
    3、是否已进行载体构建

技术服务	备注
贴壁细胞多克隆稳转细胞株构建	病毒包装+稳转
悬浮细胞多克隆稳转细胞株构建	病毒包装+稳转
干扰贴壁细胞多克隆细胞株筛选套餐	干扰质粒构建、有效干扰序列筛选、病毒包装、稳转细胞系筛选
干扰悬浮细胞多克隆细胞株筛选套餐	干扰质粒构建、有效干扰序列筛选、病毒包装、稳转细胞系筛选

多克隆细胞系、单克隆细胞系
    多克隆细胞系是基因转染后直接用抗药筛选得到的。筛选出的细胞都表达抗性基因和目的基因。但是包含了各种
不同的细胞克隆。不同克隆的目的基因整合位置和表达量均有所不同。如果转染的基因包含了荧光标签，多克隆细胞
直观地表现为包含多种不同亮度的细胞集合。
     单克隆细胞系是从多克隆细胞中经细胞克隆挑选得到的，由一个细胞扩增得到的细胞株。每个细胞的目的基因整
合位置的表达量均高度一致。

    合研生物提供稳定细胞株构建的服务，包括各个类型的GPCR和离子通道的细胞系。
    我们的细胞系都通过功能学的验证和稳定性的测试，能够为客户的药物研发提供很好的支持：
         多克隆细胞株转染构建
        抗生素克隆筛选
        功能试验鉴定阳性克隆
        阳性克隆试验条件优化
        阳性化合物验证
        稳定性验证-支原体检测

服务项目	筛选目的	客户须知	服务周期
单克隆重组细胞株	Gq型G蛋白偶联受体重组细胞系构建	基于钙离子浓度检测的单克隆细胞模型，可稳定测试20代	4-6月
	Gi/s型G蛋白偶联受体重组细胞系构建	基于cAMP浓度检测的单克隆细胞模型，可稳定测试20代	4-6月
	离子通道重组细胞系构建	基于膜电位的单克隆细胞模型，可稳定测试20代	4-6月
	报告基因重组细胞系构建	基于报告基因的单克隆细胞模型，可稳定测试20代	4-6月

      G蛋白偶联受体和离子通道都是重要的药物作用靶标。据统计，在现代药物中，有40%以上都是以G蛋白偶联受体
作为靶点的。对于G蛋白偶联受体过表达细胞株，我们一般检测细胞内的第二信使，如细胞内钙离子浓度，cAMP浓度
和IP1浓度。对于离子通道过表达细胞株，我们采用膜电位染料或钙流的方法进行检测。盛世华康提供的稳定细胞系均
经过支原体检测。
G蛋白偶联受体
Gq型G蛋白偶联受体
基于钙流检测的细胞模型，可用于激动剂，抑制剂，正/反向别构调节剂的检测。
基于IP1水平检测的细胞模型，可用于激动剂，抑制剂，正/反向别构调节剂和反向刺激剂的检测。
Gi/s型G蛋白偶联受体
基于cAMP水平检测的细胞模型，可用于激动剂，抑制剂，正/反向别构调节剂和反向刺激剂的检测。
目的基因与Gα15/16共转，基于钙流检测的细胞模型，可用于激动剂，抑制剂，正/反向别构调节剂检测。
离子通道
基于膜电位检测的细胞模型
基于膜片钳技术的细胞模型
报告基因
CRE/报告基因
    ß-内酰胺酶
    GFP绿色荧光蛋白
    荧光素酶
NFAT/报告基因
   GFP绿色荧光蛋白
   荧光素酶

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