Procedure

• DissectembryosinPBS
• Immediatelytransfertheembryostofixativeat4oC,incubateindarkfor1hour.
• Rinsetheembryoswithrinsebufferatroomtemperature3x15minutes.
• Incubateindarkwithstainingbufferat37oC3-7hoursorovernight.

Materials

1. 10%NP40
2. 1%Deoxycholate(0.5MEGTA(make1Manddilutewith4MNaOHtilldissolves.CheckpH=neutral,makeupvolumefor0.5M)
3. 0.5MK3Fe(CN)6=1.65g/10ml(red)
4. 0.5MK4Fe(CN)6=2.10g/10ml(yellow)
5. 40mg/mlX-gal(indimethylformamide)
6. 1MMgC12

1.Fixative

• 4%ParaformaldehydeinPBS

2.RinsebufferFinalconcentrationStock

• 5mMEGTA2.0ml
• 0.01%Deoxycholate2.0ml
• 0.02%NP400.4ml
• 2mMMgCl20.4ml
• Makeupto200mlwithPBS

3.StainingbufferFinalconcentrationStock

• 5mMK3Fe(CN)60.4ml
• 5mMK4Fe(CN)60.4ml
• 5mMEGTA0.4ml
• 0.01%Deoxycholate0.4ml
• 0.02%NP4080祃
• 2mMMgC1280祃
• makeupto39mlwithPBS
• add1mlofstockX-galsolutiontomakeupthefinalconcentrationof1mg/ml

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