- 重组人心肌肌钙蛋白t的表达及纯化
- 稳转细胞株(系)构建方法
- KRas信号通路其他哪些靶点还有开发机会? 四川省医药保化...
- MgCa 40对照组沉淀物能谱 EDS 分析 MgCa 40...
- 植物总RNA的提取实验原理和操作步骤
- 特拉华州经典并购判例7: Lyondell Chemical...
- GMP中小型洁净室技术改造的实用方法_工厂新闻网现代化厂房技...
- Source Bioscience拥有全球最大的cDNA、m...
- 开源数学软件Maxima的两个编译版本,maximasbcl...
- 名词onion可数吗_
- Agdia 植物病害诊断试剂盒 北京 美国 Agdia 快检...
- 织带的染色工艺简介
- [07-23]什么是稳转株? 有奖问答 学术帮助 论坛学术科研互动...
- [08-07]PAVEL NOVOTNY_
- [08-08]人血血小板衍生生长因子AB检测试剂盒
- [08-12]收到细胞株该如何处理?
- [10-02]【讨论】甲状腺包块新病例,您诊断什么? 超声医学讨论版 丁香...
- [10-02]一篇文章让你弄清楚瞬时转染与稳定转染的区别德泰生物
- [10-02]牛奶体细胞超标的危害 美篇
- [08-01]【求助】稳转株的冻存 细胞技术讨论版论坛
- [08-02]如何构建重组荧光质粒转染后稳定表达的细胞系
稳转细胞株构建技术服务
稳定表达细胞株(稳转细胞株)指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上,使细胞长期稳定表达该基因。
在基因功能的研究中,基因是否有效转染靶细胞,是功能研究的前提条件之一。而稳定表达细胞株则弥补了瞬时感染(或转染)一些功能实验中由于外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白间相互作用。
用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞,根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆的基础上,得到单细胞长出的阳性单克隆,继而得到稳定转染细胞株。常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。
产品特点:
1、稳定:保证15代以内稳定转染细胞稳定表达。
2、迅速:一般控制在1个月以内完成构建。
3、经济:价格实惠,性价比高。
4、质量保证:对外源基因进行严格鉴定。
筛选稳定细胞株的两种方法
对大多数细胞转染效率较低。对于基因过表达,如果转染效率达到40%,基因过表达尚可。但是对于基因干扰实验,对转染效率要求远远高于基因过表达,通常质粒转染无法满足。
另外,质粒游离于细胞质中,很快降解,无法满足较长时间的检测项目;质粒转染整合几率极低,稳定细胞株构建耗时耗力,且得率很低,往往需要挑取单克隆株。
2、病毒感染筛选稳定细胞株
病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。用慢病毒制备稳转细胞株,由于其高效整合、高效转录、高效表达、宿主范围广,感染效率高,且与细胞染色体整合而不发生基因重排,是制备稳定细胞株的理想载体。
稳定转染细胞株服务流程
1、载体构建:将外源基因构建到合适的载体上,如需病毒转染,则包装病毒。
2、筛选浓度测定:以10-14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
3、细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞应达到60%-80%覆盖。
4、细胞转染:用构建好的载体(或包装好的病毒)转染目的细胞。
5、抗生素筛选。
6、鉴定筛选结果。
客户需要提供
1、构建好的外源基因载体或基因模板。
2、待转染的细胞系(1×106个细胞,可传代,倍增时间小于48小时),特殊细胞需提供培养基。
我们提供
1、构建好的外源基因载体。
2、构建好的稳定细胞系。
3、构建稳转细胞株实验报告及相关的外源基因表达分析。
================ 蚂蚁淘在线 ================
免责声明:本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容
版权声明:未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘在线”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。