8eggsperday,day7-day13

cutCAM,washinprecooledPBS,

in10mlWASH1(PBS,5mMEDTA,COMPLETE)onice

cutinpiecesinpetridishonice

centrifuge4minat1000rpm(tabletopcentifuge,Falcon15mltubes)at4°C(precoolHeraeuscentrifugeinE2)

aspiratesupernatant,add10mlWASH2(PBS,5mMEDTA,5µg/mlLeupeptin+0.5mMPefablocSC)

centrifuge4minat1000rpm(tabletopcentifuge,falcon15mltubes)at4°C

aspiratesupernatant,add5mlWASH2

centrifuge4minat1000rpm(tabletopcentifuge,falcon15mltubes)at4°C

aspiratesupernatant,add1-1.5mlWASH2,transfertopreweighed2mlEppendorftubes,optionalrinseFalcontubewithca.0.5mlWASH2

centrifuge5minat2000rpm(Eppendorfcentrifuge)at4°C(precoolEppendorfcentrifugeinE7?)

aspiratesupernatant,weighandstoreat-20°C

-COMPLETEBoehringer169749820tablets345CHF

-LeupeptinSigmaL-064925mg185,90CHF

-PefablocSC(AEBSF,4-(2-Aminoethyl)-benzenesulfonylfluoride,hydrochloride)Boehringer1429868100mg75CHF

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