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Protocol for Aortic Ring Assay

蚂蚁淘  /发布时间:1630085406 /浏览量:228   

Procedures

  1. Covera48-wellplatewithMatrigel(100μl/well)ofandincubatefor30minat37°C,5%CO2.
  2. Sacrificethe1-2montholdmice/rats(WT/mutant)andexcisethoracicaorta.Transfertheaortaintoadishwithsterilized1xPBSbuffer.AfterremovingthefibroADIposetissue,sectionarteriesinto1-1.5mmlongcrosssections,rinsethesectionsfivetimeswithendothelialcellgrowthmedium(ECGM),andplacethemontheMatrigel-coatedwells.
  3. Coverthearteryringswithanadditional100μlofMatrigel.Iftherearesomebubbles,usePipettetoremovethem.Incubatetheringsin1.5mlofECGMmedium.
  4. After24hourincubation,replacethemediumwith1.5mlofendothelialcellgrowthmedium(orcontainingwiththeinterestingpeptides/compounds/others).
  5. After2days,themediumwasreplacedwithmediumoftheexactcompositionasdescribedinstep4.
  6. Attheday4,takeimagesofaorticrings.Delineatetheoutgrowthareaandmeasuretheoutgrowthmicro-vesselwiththeImageProPlussoftware(MediaCybernetic).

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