2007-11-14【求助】急寻clotech 的SMART 5’RACE试剂盒操作步骤！！

吼吼 求助啊

我有说明书,你的信箱是什么,我可以发给你

上传给你,请查收clonetech.part1.rar(195.31k)

第二部分clonetech.part2.rar(195.31k)

第三部分clonetech.part3.rar(0.76k)

谢谢虎子哥哥:)这几天没上网

谢谢啊，正在用，不过好像回复得晚了点

junqi513谢谢啊，正在用，不过好像回复得晚了点请问一下，您用这个盒子怎么样？

prettytiger1RTprimer得设计多大呢?TM值有要求吧?由于RT温度相对比较低（37－42），所以RT引物的Tm值也相应降低，Tm不要超过50度，长度以15－20bp为宜（TAKARA说明书上建议12－15bp）。一般PCR引物要求3’最好是G或C，但RT引物建议使用A或T以提高RT效率。prettytigerwrote:2两对巢式PCR的引物直接与合成的环化单链CDNA互补就可以吗?非也，非也！两对引物均为反向PCR引物，而且要注意反向嵌套。prettytigerwrote:3两对巢式PCR的引物长度及TM值有什么要求?长度和TM上可以和普通PCR一致。但避免第一次PCR残留的引物在第二次PCR中产生干扰，最好是第二对引物TM比第一对高一些，3－5度吧。prettytigerwrote:4还有什么注意的事情?太多了，特别是RT引物。RT引物要5’磷酸化；设计再好的RT引物也可能会遇到RNA有二级结构等导致RT失败的因素，所以建议设计2－3条以提高命中率（当然要先摸摸你老板的腰包）。还有TAKARA很黑的，比如3’RACE试剂盒的说明书简直就是误导，就想消费者赶紧用完再买。5’RACE试剂盒也一样，纯化过程一根柱子都不给，叫你用乙醇沉淀。不过这比较便宜，你随便用哪个公司的柱纯化盒都行。

咳咳，自顶一下没有人用过这个试剂盒么？？

求指教：longUPM的作用是什么另外，short和long的用量为什么是5:1

我也在做，不过我也不是很懂，但是不同的合成公司或者软件计算出来的TM值都是不一样的，序列既然已经确定，你就不要管他的TM值了，至于特异性引物的TM，就按照说明书上的来就好了，大于70就用程序一，小于就用程序二

我们做RACE喜欢用BDclontechSMARTRACEKit,步骤少,效率高.

求问楼主，结果如何？