RACE试剂盒
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我最近做race，用的是clonetechsmarterRACE试剂盒，但是再设计引物的时候，很难找到Tm》65，GC:50~70%的引物，一般来说Tm值可以通过增加引物长度得到满足，但是GC一般都很低都是40左右，这样的引物弄够做吗？
还有就是我准备做nestedPCR，试剂盒中提供了一个NUP（不知道试剂盒中提供的那个controlReagent序列是NUP的吗？），但是好像没有序列，那我在设计NGSP的时候不需要考虑试剂盒引物跟NGSP的二聚体或者二级结构吗？
谢谢~~
还有就是我准备做nestedPCR，试剂盒中提供了一个NUP（不知道试剂盒中提供的那个controlReagent序列是NUP的吗？），但是好像没有序列，那我在设计NGSP的时候不需要考虑试剂盒引物跟NGSP的二聚体或者二级结构吗？
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回复：时间：2010-07-28
Tm值低点式可以做的但GC含量低了就不行了。你仔细看看说明书，ShortUPM+NUP=LongUPM做巢式时，我是自己设计的引物，没有用到试剂盒给的nup。当然设计的时候还是要注意一些引物设计的基本要求的，网上又不少这方面的东西，你可以自己看看。当然，没有十全十美的引物，试试多设计几个，找出实验结果不错的那个就行。
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