##一、材料

###1.封闭：偶发的损伤修复（repairofadventitiousdamage,RAD)

（1）高分子质量基因组DNA:330ug/mL溶于TE缓冲液（10mm〇l/LTris，I



###2限制性酶切和同位素标记



###3二维电泳

3.1一向电泳（1stD)

制备凝胶和原位消化所需要的装置如图2所示。



3.2原位限制性内切酶消化



3.3二向电泳（2ndD)



###4放射自显影


##二、方法

###1.偶发性损伤修复（「封闭」，「blocking」)


###2.限制性酶切消化和同位素标记


###3.双向电泳

在建立当前的一向电泳操作程序过程中经历了大量的试验摸索。过去放射效应研究基金会（RADIationEffectsResearchFoundation)的生化遗传学计划（TheBiochemicalGeneticsProgram)曾广泛地使用了圆盘凝胶电泳系统进行蛋白质突变体的研究，现在这种技术被用于DNA上。经过多次试验，我已经在内径2.4mm的Telflon管中进行琼脂糖圆盘凝胶电泳并得到了最好的结果。我发现由于管内壁不平整，可使得在长时间的电泳过程中，琼脂糖凝胶的位置不会移动。凝胶由I.5cm0.6%的浓缩胶和59cm0•9%的分离胶组成。图3就是垂直圆盘凝胶装置。这种装置可以同时分析10个DNA样本。垂直圆盘凝胶装置可高精度地分离大分子DNA片段。此系统大大地减小了电泳的空间，并降低了原位消化需使用的昂贵的限制内切酶的量（原来的系统每个反应需要使用HinfI

3.1一向电泳


3.1.1琼脂糖圆盘凝胶的制备

3.1.2电泳

3.1.3原位限制性内切酶消化

3.2第二向电泳

3.2.1制胶

3.2.2电泳

3.3放射自显影

###4图像分析


###5RLGS用到的其他内切酶