一、材料

1.缓冲液和溶液

氯仿，NaCl(固体），聚乙二醇（PEG8000)（每500ml培养物大约用50g），SM。

2.酶和缓冲液

 胰DNaseⅠ(1mg/ml)，胰RNase(1mg/ml)于TE中（pH7.6)。

3.离心机和转子

SorvallGSA转子或相当型号。

4.专用设备

量筒（2L)。

5.载体和菌株

大肠杆菌培养物，经λ噬菌体感染和裂解。

二、方法

用PEG沉淀噬菌体颗粒

1.将含有λ噬菌体的裂解培养物冷却至室温，加胰DNaseⅠ和RNase至终浓度均为1μg/ml，室温温育30min。

2.每500ml培养物加入29.2g固体NaCl（终浓度为1mol/L)，搅拌使其溶解。将培养物冰浴1h。

再用PEG沉淀噬菌体颗粒中，NaCl的加入促进了噬菌体颗粒与细胞碎片之间的分离，因此是有效沉淀所需的。一些研究人员喜欢在加入PEG的同时加入NaCl，那样的话步骤3的离心过程可被省略。但需要告知的是，只有当噬菌体生长良好且其在最初裂解培养物中的滴度大于2X10¹⁰pfu/mI时，PEG和NaCl的同时加入才能有效地沉淀噬菌体颗粒。

3.4℃，11000g(8300r/min于SorvallGSA转子中）离心10min以去除细胞碎片，将四份培养物的上清混合置于2L的干净量筒中。

4.测定所收集上清的总体积，然后转移至2L的烧瓶中，加固体PEG至终浓度为10%(m/V，如500ml上清加50gPEG)，于室温用磁力搅拌器慢慢搅拌溶解PEG。

5.将噬菌体/PEG溶液转移至聚丙烯离心管中，于冰水浴冷却，至少放置1h以便使噬菌体颗粒发生沉淀。

6.4℃，11000g(8300r/min于SorvallGSA转子中）离心10min以回收沉淀的噬菌体，去上清，将离心管倒过来倾斜放置5min，以便使剩余液体充分流干。用移液器吸去残余的液体。

用氯仿抽提细菌碎片

7.用一带橡皮球的宽口吸管将噬菌体沉淀轻轻地重悬于SM中（针对步骤3每500ml上清加8mlSM)，将离心管倾斜放置，使SM完全覆盖并浸泡噬菌体沉淀，室温放置1h。

彻底但温和地冲洗整个离心管壁，因为噬菌体沉淀会黏附在管壁上，尤其当离心管比较陈旧有凹痕时。而如果剧烈地吸取噬菌体，容易造成其尾部的断裂。

8.通过加入等体积的氯仿抽提噬菌体悬浮液中的PEG和细胞碎片，温和振荡30s。4℃，3000g（4300r/min于SorvallGSA转子中）离心15min以分离有机相和亲水相，回收含噬菌体颗粒的亲水相。

为了测定得率，用凝胶电泳分析噬菌体悬浮液。