货号：

QS2208

规格：

50

管

/48

样

3-

磷酸甘油酸激酶

（

3-Phosphoglyceratekinase

，

PGK

）试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意：正式测定之前选择

2-3

个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

:

3-

磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化

1

，

3-

二磷

酸甘油酸转变为

3-

磷酸甘油酸，

产生

1

分子

ATP

，

具有影响

DNA

复制和修补及刺激病毒

RNA

合

成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。

测定原理

:

3-

磷酸甘油酸激酶催化

3-

磷酸甘油酸和

ATP

产生

1,3-

二磷酸甘油酸和

ADP

，

1,3-

二磷酸

甘油酸在

3-

磷酸甘油醛脱氢酶和

NADH

作用下产生

3-

磷酸甘油醛、

NAD

和磷酸，

340nm

处的吸

光度变化反映了

3-

磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

自备实验用品及仪器

:

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、

1mL

石英比色皿。

试剂组成和配制

:

提取液：液体

100

mL×1

瓶，

4

℃保存。

试剂一：液体

25mL

×1

瓶，

4

℃避光保存。

试剂二：粉剂×1

瓶，

-20

℃避光保存。临用前加

5mL

蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分

装后

-20

℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1

瓶，

-20

℃避光保存。临用前加

2.5mL

蒸馏水充分溶解；用不完的试剂

分装后

-20

℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：粉剂×1

瓶，

-20

℃避光保存。临用前加

2.5mL

蒸馏水充分溶解；用不完的试剂

分装后

-20

℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：粉剂×1

瓶，

-20

℃避光保存。临用前加

10mL

蒸馏水充分溶解；用不完的试剂

分装后

-20

℃保存，禁止反复冻融。

酶液提取：

①总

PGK

酶提取：

建议称取约

0.1g

样本，

加入

1mL

提取液，

冰浴匀浆后超声破碎

（冰浴，

200W

，

破碎

3s

，间歇

7s

，总时间

1min

）

，然后

4℃，

500g

离心

5min

，取上清测定。

②胞浆和叶绿体

PGK

酶的分离：按照植物组织质量（

g

）

：提取液体积

(mL)

为

1

：

5

～

10

的比例

（建议称取约

0.1g

样本，加入

1mL

提取液）

，冰浴匀浆后于

4℃，

500g

离心

5min

，弃沉淀，

取上清在

4℃，

8000g

离心

10min

，取上清用于测定胞浆

PGK

酶活性，取沉淀加

1mL

提取液，

震荡溶解后超声破碎（冰浴，

200W

，破碎

3s

，间歇

7s

，总时间

1min

）

，然后

4℃，

500g

离心

5min

，取上清测定叶绿体中

PGK

酶活性。

建议测定总

PGK

酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的

PGK

，则

按照步骤②提取粗酶液。

测定操作：

1.

分光光度计预热

30min

，调节波长至

340nm

，蒸馏水调零。

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