酪蛋白激酶分析实验一基本方案用 β酪蛋白相关交流-蚂蚁淘在线

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实验方法原理
实验材料	β-酪蛋白（溶于水）有酪蛋白激酶活性的酶样品
试剂、试剂盒	[γ-32P]ATP溶液酪蛋白激酶反应缓冲液TCASDS-PAGE样品缓冲液
仪器、耗材	30℃水浴P81磷酸纤维素膜离心管离心机
实验步骤	1.每个鉴定反应按以下比例将各反应组分加入1.5ml微量离心管中： 4μl5×酪蛋白激酶反应缓冲液 1μl10mg/mlβ-酪蛋白 1μl[γ-³²P]ATP溶液（ATP终浓度为5μmol/L，放射活性为5μCi/μl） 1～14μl水盖好离心管，混匀，放入30℃水浴温育10min。 2.加入1～14μl有酪蛋白激酶活性的酶样品开始反应。 3.30℃水浴，10min。 4.按不同的分析方法加入适当的试剂停止反应：加入20μl10%的预冷TCA进行TCA沉淀，或10～20ml预冷的2×SDS-PAGE样品缓冲液进行电泳分析。用那些方法中的一种继续进行分析。
注意事项	1.对于Cr酪蛋白也可使用该反应混合物。每个反应的容积为20μl。在步骤2中加入水的量取决于所用酶样品的多少。 2.加入酶量的容积取决于样品中酶活性的大小。在预试验中所得的最大反应值可衡量磷酸转移反应的程度。在反应中为了保持磷酸基与底物的线性结合关系可适当减小酶的加量。
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酪蛋白激酶分析实验一基本方案 用 β酪蛋白