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某种转录因子有四种不同的亚型(N1N2N3N4),我想检测它们在某种细胞内的表达情况,能不能提取这种细胞的蛋白,然后跑western,通过敷育四种对应的抗体最后来确认哪种亚型表达得多,哪种亚型表达得少呀?我做了三次western,结果在对应的分子量区域都没有呈现条带出来!有前辈说这样做是无意义的,因为细胞可能对不同抗体的敏感性不同,所以跑western时用一种样本分别敷四种抗体的话是没有可比性的。真的是这样吗?我看文献里也有人做不同蛋白亚型在组织中的表达,他们能做出来条带。求各路大神指点啊!(抱拳)
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回复:时间:2017-03-27
这个用WB感觉不行,有没有专门的试剂盒可以检测亚型?不知道ELISA或者流式能不能检测?ELISA一般是检测分泌性蛋白,流式检测细胞膜蛋白,你这个是细胞内的,不知道破膜行不行?
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回复:时间:2017-04-02
春困秋乏夏打盹这个用WB感觉不行,有没有专门的试剂盒可以检测亚型?不知道ELISA或者流式能不能检测?ELISA一般是检测分泌性蛋白,流式检测细胞膜蛋白,你这个是细胞内的,不知道破膜行不行?Elisa和流式应该不行,我的这种蛋白在细胞静息时位于胞浆,细胞被激活时转运进核。我是用ripa加pmsf裂解的,提取的应该是细胞总蛋白,这样做wb不行的吗
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