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回复：时间：2016-11-15
设计引物进行目的片段PCR扩增，引物设计要保证目的片段两端有至少15~20bp序列与线性化载体的两端一致便于连接反应的进行。PCR引物包括5’端与载体同源的15~20bp以及目的片段特异性序列20~25bp（见下图）图中.采用HB-infiusionTM试剂盒时PCR上下游引物设计示例。针对双酶切法线性化载体设计插入片段的PCR引物，其重叠区域为15bp+酶切位点，这样重组成功的质粒上会完好保留此两个酶切位点。如果是PCR法线性化载体，扩增插入片段的PCR引物5’端直接设计成与线性化载体末端15~20bp重叠即可。更详细的信息这家网站上面有http://www.hanbio.net/cn/products/item/12039还有免费的试用装申请哦http://www.biomart.cn/infosupply/35645008.htm
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