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生物素酰化探针的检测实验一化学发光法
蚂蚁淘
/发布时间:1533257175 /浏览量:134
| 实验材料 | DNA 试剂、试剂盒 | 生物素磷酸酶 仪器、耗材 | 紫外灯离心机
实验步骤 | 1. 用夹子固定已转印的尼龙膜的边角于一小片干的吸水纸上，样品面朝上，放进温箱内12~80℃放15~30min或温室晾干过夜。 2. 将带核酸的面朝上暴露于紫外灯下，用最适的时间交联。 3. 用生物素探针与膜杂交，用适当强度的洗液洗涤。 4. 杂交后、将膜置于杂交袋中。 5. 封口，在一个角留有一小孔便于加入和排出液体。 6. 加入1体积的封阻液、室温作1min轻微摇动、倒干溶液。 7. 加入1mg/ml链亲和素至1体积的封阻液至终浓度为1μg/ml，在杂交袋中室温温育4min，轻微摇动，倒干溶液。 8. 加入10体积诜液I，室温洗膜4min轻微摇动，倒干溶液，重复1次。 9. 加入生物素酰化碱性磷酸酶至1体积的封阻液，室温作用4min轻微摇动、倒干溶液。 10. 用10体积洗液I洗膜2次，同步骤8。 11. 用0.5体积底物稀释液稀释化学发光底物，在杂交袋中室温作用4min轻微摇动，打开杂交袋，尽可能倒干溶液。 12. 压平杂交袋上的折皱，重新封口，结合核酸的一面向上，用一张X光片压好，在暗盒内曝光10~20min。
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