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基因枪法转化小麦实验一准备供体材料

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实验材料	幼胚盾片
试剂、试剂盒	乙醇漂白消毒剂
仪器、耗材	诱导培养基
实验步骤	下面介绍的是经过优化的针对幼胚盾片转化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。对某些特定的品种，幼穗转化比幼胚盾片转化更有效，如普通小麦品种T.aestivumvars.Baldus和BrigADIer，以及其他小麦亚族Triticeae；硬粒小麦品种T.turgidumssp和小大麦（见注23和注24)。 1.收集和消毒小麦颖果 (1)收集温室生长10~12周的小麦穗（见注25)。 (2)从穗中剥出颖果（见注26)。 (3)用70%乙醇将小麦颖果灭菌5min，然后用10%漂白消毒剂浸泡15~20min，中间晃动几次。 (4)用灭菌水至少洗三次。保持灭菌后颖果的湿度，但是不要浸泡在水中。 2.分离和预培养幼胚盾片 (1)在无菌环境中，显微镜下分离幼胚[图4.1(a)]并且切除胚轴以防止萌发(见注27)。 (2) 将25~30个盾片放置在包含诱导培养基（MS9%0.5DAg）、直径9cm的培养皿的中间区域，将胚的切面放置在培养基上，即完整的盾片作为轰击面[见注28,图4.1(b)]。 (3) 使用封口膜Nescofilm (Fisher Scientific UK)封好平板，轰击前将培养皿放在22℃黑暗条件下预培养1~2天（见注29)。