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过氧化氢酶的活性测定实验
蚂蚁淘
/发布时间:1533259737 /浏览量:35
| 实验方法原理 | H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 |
|---|---|
| 实验步骤 | 一、仪器与用具 紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴； 二、试剂 0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）； 0.1mol/LH2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）。 三、方法 1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2～3ml4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。 2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表40-2顺序加入试剂。 紫外吸收法测定H2O2样品液配置表
25℃预热后,逐管加入0.3ml0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。 3.结果计算：
|
| 注意事项 | 凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰 |
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