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转基因植株的选择实验一转基因植物的分析
蚂蚁淘
/发布时间:1533494101 /浏览量:134
| 实验材料 | 叶片 试剂、试剂盒 | 液氮DNA纯化试剂盒bar基因引物吐温PPT 仪器、耗材 | PCR分析塑料盆
实验步骤 | 一、PCR分析 1.当植株长到合适大小时（即3~4张叶片），取约2cm长的叶片，立即放于液氮中，抽提基因组DNA。 2.在液氮中将叶片磨成粉末状，并使用Wizard基因组DNA纯化试剂盒提取基因组DNA。 3.为了确定是否为转基因植株，利用bar基因引物1和引物2对DNA做PCR分析，退火温度为57℃。 4.将PCR阳性植株移栽到直径为13cm的塑料盆中，并继续在转基因封闭温室中生长。 二、除草剂叶片涂抹检测 1.用0.1%吐温将除草剂母液（如Challenge)稀释成两种浓度，其活性成分PPT浓度分别为 2.0g/L和0.2g/L。 2.每个待测植株，尽可能在不同分蘖上选择三张大小相近、生长健壮的叶片，避免取旗叶。立即在所选叶片植株的茎秆上做标记，分别标注为0.2g/LPPT、2.0g/LPPT和对照（0.1%吐温）处理。 3.用圆珠笔在每张叶片长度一半的位置做标记用棉签蘸取适量溶液涂抹于叶片远端的半张叶片表面。 4.为使除草剂生效，将植株放置7天后再评估抗/感情况。 5.在涂抹了除草剂溶液的位置，根据除草剂溶液涂抹区域干枯伤害的百分率和除草剂转运对叶片近端区域伤害的百分率，对每张处理的叶片进行评分。 6.如果0.2g/LPPT和2.0g/LPPT处理的叶片都没有检测到伤害症状，则可认为这一植株是转基因的；如果只在低浓度处理下表现出抗性，应当再用其他方法进行确认。 
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