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碱水解和由二吲哚碳酰的活化实验一基本方案

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实验方法原理
实验材料	酶溶液
试剂、试剂盒	磷酸钾NaClNaOH二氧杂环乙烷羰基二咪唑
仪器、耗材	吸滤器聚酯小片
实验步骤	实验所需「试剂」具体见「其他」 1.碱解和活化聚酯小片（每片2cm²，10片）在10ml10％（质量浓度）NaOH中室温孵育10min。用水冲洗五次，每次10ml，之后浸没在二氧杂环乙烷中30min，然后用二氧杂环乙烷冲洗五次以去除残留的水。其后，聚酯小片在溶有35g/l羰基二咪唑的二氧杂环乙烷中孵育30min。最终用二氧杂环乙烷冲洗五次、用0.1mol/LpH7.5的磷酸钾冲洗三次。 2.酶的偶联聚酯小片浸没在10ml的酶溶液中，在室温过夜孵育，对于敏感的酶在4℃孵育。在吸滤器上先用溶有0.5mol/LNaCl的0.1mol/LpH7.5磷酸钾冲洗，再用0.1mol/LpH7.5磷酸钾冲洗，以去除未结合的酶。聚酯小片能在缓冲液中4℃下储存一周。为了储存更长时间，必须用水短暂冲洗这些聚酯小片后在空气中干燥（不推荐在敏感的酶中使用）。
注意事项
其他	试剂： 0.1mol/LpH7.5的磷酸钾溶有0.5mol/LNaCl的0.1mol/L磷酸钾，pH7.5 100g/lNaOH 二氧杂环乙烷溶有35g/l羰基二咪唑（CDI，Mr＝162.2）的二氧杂环乙烷