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回复:时间:2017-04-09
贤的小石子儿有两个方法,一是减少引物的量。二是换引物了还想再请教您一个问题,当时因为时间紧张,没来得及直接做标准曲线,直接扩增了,后来师兄根据上机结果直接选了一个模板的稀释浓度,出来的结果是这样的,现在还需要再做一个标准曲线吗,这样出来的结果是不是不能去做△△T计算,谢谢您~
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回复:时间:2017-04-07
小新2018还想再请教您一个问题,当时因为时间紧张,没来得及直接做标准曲线,直接扩增了,后来师兄根据上机结果直接选了一个模板的稀释浓度,出来的结果是这样的,现在还需要再做一个标准曲线吗,这样出来的结果是不是不能去做△△T计算,谢谢您~呵呵,太客气了,相互学习~你是做相对定量么?相对定量如果不是医学应该还好,是做医学相关的话那就最好严谨一点吧,这是我的个人看法。
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回复:时间:2017-04-05
贤的小石子儿呵呵,太客气了,相互学习~你是做相对定量么?相对定量如果不是医学应该还好,是做医学相关的话那就最好严谨一点吧,这是我的个人看法。还是很谢谢您的,是医学相关的,师兄说我的不需要做标准曲线看扩增效率,所以就没有做了
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回复:时间:2017-04-04
小新2018还是很谢谢您的,是医学相关的,师兄说我的不需要做标准曲线看扩增效率,所以就没有做了我做相对定量的话,首先是看rna提取完整性,跑胶三条带,然后,是引物特异性,直接pcr扩增看效果,都可以就上机。
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回复:时间:2017-04-07
贤的小石子儿我做相对定量的话,首先是看rna提取完整性,跑胶三条带,然后,是引物特异性,直接pcr扩增看效果,都可以就上机。并且内参和目的基因的ct值有区间吗?现在出的结果内参16左右,一个目的基因ct值27左右,另外一个目的基因21左右,两个目的基因的表达是正相关的
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回复:时间:2017-04-06
贤的小石子儿你好,定量引物设计跨内含子的目的就是为了排除DNA污染的干扰,所以最好是跨外显子的,但是在特殊情况下,不夸也可以。好的,我明白了,您指导我解决了很多的困惑,非常感谢您的耐心解答!
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回复:时间:2017-04-10
贤的小石子儿你好,定量引物设计跨内含子的目的就是为了排除DNA污染的干扰,所以最好是跨外显子的,但是在特殊情况下,不夸也可以。抱歉,还想再请教您最后一个问题,就是内参和目的基因的ct值有区间吗?现在出的结果内参16左右,一个目的基因ct值27左右,另外一个目的基因21左右,两个目的基因的表达是正相关的,这样的结果可以吗?
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回复:时间:2017-04-06
小新2018抱歉,还想再请教您最后一个问题,就是内参和目的基因的ct值有区间吗?现在出的结果内参16左右,一个目的基因ct值27左右,另外一个目的基因21左右,两个目的基因的表达是正相关的,这样的结果可以吗?大家互相交流,我自己也可以复习,双赢。Ct值是有区间的,一般认为内参在15~25都是可信的,目的基因在35之内,超过了可以认为是不表达。当然这个也是众说纷纭,我现在的基准是这个。
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回复:时间:2017-04-12
贤的小石子儿大家互相交流,我自己也可以复习,双赢。Ct值是有区间的,一般认为内参在15~25都是可信的,目的基因在35之内,超过了可以认为是不表达。当然这个也是众说纷纭,我现在的基准是这个。好的呢,非常感谢您!
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