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在使用NEB的T4DNA连接酶，想请问一下平末端连接的体系和反应温度、时间，因为之前用了10微升的体系，2微升buffer，1微升载体，6微升目的片段，1微升T4连接酶，没成功，有用过的同志们帮帮忙。
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回复：时间：2021-07-29
mparkYourligationisfine.Howdoyoudeterminetheligationisfailed?我后面将连接产物转化带了DH5a的感受态细胞中，然后在含抗生素的LB培养基上凃板，但是没有长出来。我问了周围的同学，他说我做的平末端，那个体系是黏性末端的体系，所以我已经调整体系重新再做了。
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