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2008-06-16【求助】请问，用T4连接酶连接以后，做转化时，还需要酒精沉淀吗？

lihui20021303
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请问，用T4连接酶连接以后，做转化时是否需要酒精纯化一下？还有一个问题，用T4聚合酶补平粘性末端以后，可以直接用来做连接吗？
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相关回复

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回复：时间：2008-06-19

我一般都是连接后直接用反应溶液进行转化的。转化大肠杆菌时只要有50ng质粒转入细菌即可完成成功克隆，因而不必为此再次纯化。乙醇沉淀后反而损失很大，不一定能保证转化结果了。

有用（0）

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回复：时间：2008-06-19

直接转化就行了。

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回复：时间：2008-06-24

如果是电转化，就必须纯化；如果是化学转化，无需纯化。

有用（0）

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回复：时间：2008-06-21

我电转放2ul也不需要纯化，如果再多就需要了，否则会有电火花

有用（0）

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回复：时间：2008-06-18

粘性末端补平以后，要做连接，还需要纯化吗？可不可以直接用补平的反应液来做连接哪？

有用（0）
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