1.对于贴壁培养的单层细胞：

1.1感染CV-1贴壁单层细胞：在病毒感染前一天，用完全MEM-10培养基将5×10⁵细胞/孔加入6孔组织培养板培养，直至细胞几乎汇片生长（一般过夜）。

1.2胰酶消化病毒储液。每份病毒储液加入等体积的0.25mg/ml胰酶，涡旋混匀，温育30min，每隔5～10min晃动一次。

MOI为10pfu/细胞可以获得高水平的蛋白质表达。

如果还有团状物，将其冷却到0℃，冰上超声30s。可以重复几次超声，但超声的间隔中样品应当置冰上冷却（见「痘苗病毒系统基因表达实验」中「重组痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂质体转染」）。

1.3将两种胰酶消化的病毒储液混合。

1.4将胰酶处理后的病毒用MEM-2.5培养基稀释至4×10⁷pfu/ml(每种病毒为2×10⁷pfu/ml）。

1.5吸出培养基，用0.5ml的病毒混合液感染6孔板中每孔的细胞，温育1～2h，每隔15～30min晃动一次。

1.6加入2ml的DMEM-10培养。根据使用的方法，在感染后5～24h分析基因表达。如果纯化蛋白质，在感染2～3天后收获细胞。

注：尽管在感染后数小时就可以检测基因表达，但一般在病毒感染的晚期进行免疫沉淀、免疫印迹或Northern印迹分析，因为这时T7控制的基因产物积聚到最高水平。早期分析一般检测表达蛋白的生物学活性。

2.对于悬浮培养的细胞：

2.1感染HeLaS3悬浮细胞：在病毒感染前，用血球计数器对细胞进行计数,在室温下1800g离心5min，弃上清。用转瓶MEM-5培养基重悬细胞至2×10⁷细胞/ml，将其转移到较小的无菌组织培养瓶或Erlenmeyer瓶中。

2.2胰酶消化病毒储液。每份病毒储液加入等体积的0.25mg/ml胰酶，涡旋混匀，温育30min,每隔5～10min晃动一次。

MOI为10pfu/细胞可以获得高水平的蛋白质表达。

如果还有团状物，将其冷却到0℃,冰上超声30s。可以重复几次超声，但超声的间隔中样品应当置冰上冷却（见「痘苗病毒系统基因表达实验」中「重组痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂质体转染」）。

2.3将两种胰酶消化的病毒储液混合。

2.4将胰酶消化病毒混合物加入浓缩细胞中，37℃悬浮培养。

2.5将感染后的细胞加入到大的旋转培养瓶中，用转瓶MEM-5培养基将其稀释至5×10⁵细胞/ml，37℃悬浮培养1～3天。

2.6收获细胞，分析或纯化表达蛋白（见步骤1.6注释）。