佰柯生物科技有限公司是一家专业从事重组蛋白等生物产品的研发和生产的高科技生物公司。

    公司主要业务是利用基因工程技术和蛋白质工程技术生产具有生物活性的功能蛋白和小分子肽类，并在此基础上开发医疗、畜牧业、化妆品相关的产品。佰柯生物拥有自己独立的研发团队和来自世界顶端科研单位各个领域学术顾问团队，研究领域包括生物化学，分子生物学，基因工程药物，临床医学等多个方向。

    公司产品范围涉及广泛，包括：重组蛋白（生长因子、小分子多肽等），多克隆及单克隆抗体系列产品，蛋白质生物化学研究和基因学研究相关分子生物学产品，病毒载体以及ELISA试剂盒和食品安全检测试剂盒等，同时也代理多家国外公司产品在中国的销售。公司产品质量优异，价格优于同类产品，且应用领域广泛，相信不远的将来，佰柯会被世人所瞩目。

    公司官网：www.backerbiotech.cn

T7 RNA Polymerase 

产品内容

产品名称	产品编号	分子量	酶活	储存条件
T7 RNA Polymerase	BBR0029	99 kDa	50 U/µl	-20℃

产品概述

T7 RNA Polymerase（T7 RNA聚合酶）是一个DNA依赖性的单亚基RNA聚合酶，专门催化5→3方向的RNA形成过程。该酶高度特异性识别T7启动子序列，可以催化单链或双链DNA中T7启动子下游NTP的掺入，合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。该酶由大肠杆菌表达纯化获得，表达基因为嗜菌体T7 RNA Polymerase基因。

用途

用于RNA合成，合成的RNA可以用于或用作：杂交探针，基因组DNA序列分析，核糖核酸酶保护测定，反义RNA合成，作为体外翻译的RNA模板，RNA剪接研究的底物，RNA二级结构和RNA-蛋白质相互作用，核酸扩增分析，siRNA、miRNA等小RNA。

活性定义

1单位（U）T7 RNA Polymerase活性定义为在37℃、pH 7.5的条件下，1小时内催化1 nmol AMP 掺入到多聚核苷酸中所需的酶量。

活性定义反应液

40 mM Tris-HCl, pH 7.5；6 mM MgCl2；2 mM spermidine；10 mM DTT；0.5 mM NTP；0.6 MBq/ml [3H]-ATP；20 µg/ml含特定的T7 RNA聚合酶启动子序列的质粒DNA。

产品溶液组分

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH7.5)，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% tritonx-100，50% glycerol。
Transcription Buffer (5×)：200 mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃)，30 mM MgCl2，50 mM DTT，50 mM NaCl，10 mM spermidine。
反应条件
反应在1×Reaction Buffer（20 mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃)，3 mM MgCl2，5 mM DTT，5 mM NaCl，1 mM spermidine）中进行。
蛋白纯度
不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。经SDS-PAGE检测，该蛋白纯度可达到95%以上。
失活或抑制
70℃加热10分钟或者加入适量EDTA 可使T7 RNA Polymerase失活。螯合剂、浓度大于150mM的钠、钾或铵盐可以显著抑制T7 RNA Polymerase的活性。

储存条件

-20 ℃保存（长期请保存于-80℃），避免反复冻融。Transcription Buffer (5×) 置于-20 ℃保存。

使用例

1. RNA合成：
1）DNA模板经限制性核酸内切酶酶切线性化。
2）酚/氯仿抽提DNA，用乙醇沉淀后，溶于适量的无菌ddH2O中。
3）参考如下设置反应体系：
Transcription Buffer (5×)     10 µl   
NTP Mixture (10 mM each)   10 µl (终浓度为2 mM)
线性DNA模板             1 µg
Ribonuclease Inhibitor        50 U
T7 RNA Polymerase          30 U
补充经DEPC处理的ddH2O  至50 µl
4）按上述体系设置好后，轻轻混匀并瞬离液体。
5）37℃孵育1~2个小时。
6）加入2 µl 0.5M EDTA (pH 8.0)到反应体系中混匀或-20℃冷却终止反应。
7）电泳分析转录产物，或通过其他适当方法鉴定转录的效率。
注意： 
1）反应体系需在室温条件下配置，4℃有亚精胺(spermidine)存在时DNA可发生沉淀。
2）按以上反应条件，每1 µg模板DNA可合成超过10 µg的RNA。
3）如果模板DNA的线形化不太完全，会导致转录出比预期长度更长的RNA，同时会降低预期长度的转录本比例。
4）可根据实际情况按照比例放大或缩小上述反应体系。
2. 其它用途请参考相关文献资料进行。
 
 
 
 
 
 

温馨提示：不可用于临床治疗。