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粘粒和质粒克隆的纯化实验一基本方案
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| 实验材料 | 质粒 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | LB抗生素 |
| 仪器、耗材 | 涂布棒硝酸纤维滤膜 |
| 实验步骤 | 1. 通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。 2. 用无菌的牙签挑出阳性克隆，接种到含适当抗生素的1ml冷的LB培养基中，保存在4℃抑制细菌生长。 3. 取1~25μl菌悬液涂布在含有相同抗生素的平板上，37℃培养过夜，在直径100平板上长出25~250个菌落为宜。 4. 将菌落影印在硝酸纤维素滤膜上，变性、复性、烤膜和杂交化。 5. 对照次级平板的放射自显影结果，挑选独立的阳性克隆，培养扩增后分离质粒或粘粒的DNA。 |