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人小肠平滑肌细胞提取物
货号: EH0064 运输方式: 干冰 器官来源: 消化系统 欣润生物提供高质量的人、大鼠、小鼠即用型原代细胞提取物,包括基因组DNA、CDNA、总RNA、microRNA、总蛋白和细胞沉淀。我们提供的即用型原代细胞提取物可有效节约您为培养原代细胞并分离相应提取物所需的时间和精力。为确保可靠的实验结果,产品的数量和质量需经严格的质控测验。这些高质量的原代细胞提取物为细胞株试验的验证、各种生物医学数据的研究提供了强有力的工具。
基因组DNA制备:采用酶解法裂解细胞,利用硅胶膜离心柱特异地吸附DNA,去除蛋白质、盐类、脂类等杂质,有效地保持基因组DNA的完整性。提取的DNA适用于酶切、PCR、SouthernBlot等实验。
总RNA制备:利用QiagenRNeasyKit的Trizol试剂分离RNA,然后用QiagenRNACleanKit进行纯化。欣润生物提供的总RNA样品附有RNA样品OD值、浓度、总含量等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及2μg总RNA。68℃反应10min后终止RT反应。利用1xRTBuffer运输cDNA,1μlcDNA足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的质控分析,保证了产品的质量。
microRNA制备:采用具有超强的裂解能力和抽提灵敏度microRNA试剂盒制备,结合试剂盒采用的特殊吸附膜,大大增加了小分子RNA的吸附力,获得的microRNA纯度好,得率高,可以直接用于各种下游实验,如NorthernBlot分析,Real-TimePCR,MicroarrayAnalysis等。
蛋白制备:利用改良型RIPABuffer(50mMTris,pH7.2,150mMNaCl,1mMEDTA,1mMEGTA,1%NP-40,1mMNa3VO4,5mMNaF,400uMPMSF,1ug/mlofPepstatinA,5ug/mlofAprotinin,5ug/mlofLeupeptin)制备细胞蛋白裂解液,离心去除细胞碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer(50mMTris-HCl,pH6.8,5%Glycerol,1%SDS,0.002%BromphenolBlue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。
细胞沉淀制备:首先分离培养出高质量的原代细胞,然后经平衡盐溶液清洗去除细胞表面杂质,最后用合适的裂解液裂解细胞并离心获得细胞沉淀。
潜在的应用:<1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4>WesternandNorthernBlot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱分析。
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