内参是内在参照，在各组织和细胞中表达相对恒定，在检测某些功能蛋白的表达水平变化时用它做参照物，可以校正蛋白定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。下面对这些抗体进行简要介绍：

Actin：即肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin和γ-non-muscleactin。β-actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富，其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下，如脂肪组织或细胞内，β-Actin的表达量就很少。β-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。

GAPDH：（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Westernblot蛋白质标准化的内参。

Tubulin：即微管蛋白，是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin，其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成异源二聚体，是形成微管的最主要的两种Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa，其实际检测条带均在55kDa左右。作为内参，β-tubulin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于WesternBlotting时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。

如何选择内参：

(1)考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上；

(2)不同的组织来源的样本在选择内参时还有一定的区别。比如某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高，不适合做内参；

(3)内参抗体可检测的种属类型越多，在使用过程中的选择余地就越大；而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体，联科品牌的内参抗体均为小鼠单抗；

(4)抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率.联科品牌的内参稀释比均达到1:1000-1:10000.。

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