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病毒的血清学实验一ELISA检测乙脑病毒早期特异性IgM抗体

蚂蚁淘 /发布时间:1627752602 /浏览量:268

实验方法原理	将抗μ链球蛋白（豚鼠抗兔IgM抗体）非特异地吸附在固相上，加入待检乙脑病人血清，血清中的IgM能和抗μ链球蛋白结合。当再加入定量特异性日本乙脑病（JBEV）抗原和酶标记的相应抗体（兔抗IBEVIgG）时，病人血清抗体再与IBEV抗原和酶标抗IBEVIgG结合作用于酶底物，酶底物显色反应，借此可测出血中IgM抗体的含量。
实验步骤	1. 用包被液稀释豚鼠抗兔IgM抗体至l0（g/ml，加至40孔板，每孔0.2m1。置湿盒37℃1小时，再置4℃过夜。用洗涤液洗三次。 2. 用稀释液稀释待检血清，然后加至40孔板，每孔0.2ml。置湿盒，37℃1小时，用洗涤液洗三次。 3. 用稀释液将乙脑病毒抗原稀释至50个血凝单位，对照抗原用同法稀释。分别加入40孔板中，每孔0.3ml。置湿盒4℃过夜，用洗涤液洗三次。 4. 用稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的兔标JBEVIgG，加至40孔板，每孔0.2ml，37℃l小时，用洗涤液洗三次。加邻苯二胺（OPD）底物液，每孔0.2ml。避光置室温30分钟。加2MH2SO40.05m1，终止反应。用分光光度计测出各孔OD值，波长选择495nm。 4. 结果 P/N（3.0为血清JBEVIgM抗体阳性。标本平均OD值-空白对照OD 阴性对照OD值一空白对照OD

实验方法原理

将抗μ链球蛋白（豚鼠抗兔IgM抗体）非特异地吸附在固相上，加入待检乙脑病人血清，血清中的IgM能和抗μ链球蛋白结合。当再加入定量特异性日本乙脑病（JBEV）抗原和酶标记的相应抗体（兔抗IBEVIgG）时，病人血清抗体再与IBEV抗原和酶标抗IBEVIgG结合作用于酶底物，酶底物显色反应，借此可测出血中IgM抗体的含量。

实验步骤

1. 用包被液稀释豚鼠抗兔IgM抗体至l0（g/ml，加至40孔板，每孔0.2m1。置湿盒37℃1小时，再置4℃过夜。用洗涤液洗三次。

2. 用稀释液稀释待检血清，然后加至40孔板，每孔0.2ml。置湿盒，37℃1小时，用洗涤液洗三次。

3. 用稀释液将乙脑病毒抗原稀释至50个血凝单位，对照抗原用同法稀释。分别加入40孔板中，每孔0.3ml。置湿盒4℃过夜，用洗涤液洗三次。

4. 用稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的兔标JBEVIgG，加至40孔板，每孔0.2ml，37℃l小时，用洗涤液洗三次。加邻苯二胺（OPD）底物液，每孔0.2ml。避光置室温30分钟。加2MH2SO40.05m1，终止反应。

用分光光度计测出各孔OD值，波长选择495nm。

4. 结果

P/N（3.0为血清JBEVIgM抗体阳性。

标本平均OD值-空白对照OD

阴性对照OD值一空白对照OD

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