相关文章
促销商品
最新问答
- [11-07]Ig的生物学功能包括()
- [08-23]简述抗体的种类和主要功能
- [11-12]甲状腺功能五项检查,两项抗体高_什么原因?该注意些什么?还需要...
- [08-15]【doc】慢性功能性便秘诊断治疗体会
- [08-17]抗体的结构与功能
- [08-20]抗体分为哪几类,描述抗体的功能(根据抗体结构叙述)_
- [08-19]抗体的生物学功能有哪些_医联媒体
- [08-11]简述抗体的生物学作用_
- [08-16]三九蛋白肽的三九蛋白肽的免疫功能
精选品牌
热卖商品
免疫球蛋白标记技术_荧光素标记抗体技术
蚂蚁淘
/发布时间:1626802201 /浏览量:337
| 实验方法原理 | 目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocynate，FITC）或罗达明（LissaminerhodamineB200，RB200）。在碱性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光激发下产生黄绿色荧光，通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 抗体 试剂、试剂盒 | FITCPBSDMSO碳酸盐缓冲液 仪器、耗材 | 搅拌器紫外分光光度计
实验步骤 | 1. 将纯化的IgG抗体对PH9～9.5碳酸盐缓冲液透析过夜，透析后抗体液移入小烧杯中 2. 称取适量IFTC，加入二甲亚砜（DMSO）（FITC～1mg/1mlDMSO），使终浓度为1mgFITC/1mlDMSO FITC/IgG比例 如IgG浓度为1mg/ml，FITC/IgG比例约为50μgFITC/mgIgG； 如IgG为5～10mg/ml，则比例为25μgFITC/mlIgG 在10ml小烧杯中先放入抗体 3. 按上述比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中 4. 将标记物用PBS加至2.5ml，磁力搅拌器室温下避光搅拌2h，用PD10柱（SephadexG25柱）除去游离荧光素，先用25mlPBS淋洗G25柱。收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，测定F/P比值。第二个荧光素峰为游离荧光素。 计算： 2.87×A495 F/P＝──────── A280-0.35×A495 合适的F/P值为2～4。 注意事项 | 1. FITC保存于4℃暗处，使用前待试剂瓶升至室温时开盖称取，以避免潮解。 2. FITC-DMSO液要临用时配制。 3. 碳酸盐缓冲液要新鲜配制。
================ 蚂蚁淘在线 ================ 免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容 版权声明：未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘在线”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。 相关阅读
|
