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菌脂多糖的制备实验一热酚提取法
蚂蚁淘
/发布时间:1533505697 /浏览量:243
| 实验方法原理 | 原理是将细菌悬液加于热酸——水混合液中，冷却，离心混合液可分为水溶液层，内含水溶性脂多糖及核酸等及酸层、内含蛋白质。近年来发现在酸层中也含糖类。经离心后沉淀含细胞残体。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 细菌浓悬液 试剂、试剂盒 | 热酚盐水 仪器、耗材 | 离心机培养箱透析膜
实验步骤 | 1. 细菌浓悬液用盐水经2500转/分，20分钟离心洗涤一次。 2. 将沉淀的菌混匀于蒸馏水中，放66℃水浴，然后滴加等量的90%热酚溶液（预热至66℃），边加边摇，而后在66℃水浴中搅拌25分钟 3. 在水浴中冷却，于4℃冰箱过夜 4. 以2000转/分离心15分钟 5. 将上层水溶液吸到另一试管中 6. 剩下的酚层及残渣组分可再加上述同量水在热水浴中搅拌30分钟，冷却，离心，取上层水溶液。将两次提的水溶液混合，置透析袋中于生理盐水中透析2天，其间换几次盐水，以除去酚。 7. 透析后的水溶液层经浓缩（如用聚乙二醇在透析袋外层涂抹以除去水分）。即成粗制脂多糖，于冰箱内保存备用。
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