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培养细胞染色体显示法实验一人末梢血微量全血培养染色体显示法
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实验方法原理 | 显示人染色体过去主要取骨髓培养,利用其中干细胞能进行增殖显示染色体。末梢血淋巴细胞是已发生分化、处于功能态(G0期)和无分裂活动的细胞。 但在PHA的诱导下,T淋巴细胞可重新进入增殖态发生细胞分裂。 为获得淋巴细胞可用多量血分离(10ml)和微量全血培养两种方法。 多量血法较繁锁已少用,用微量全血培养法效果与多量血相同。每次从被检者静脉或指尖、耳垂等处仅采少量血(0.5ml~2ml),即可够做数个样品的培养,从而极大简化了观察人染色体的方法。 |
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试剂、试剂盒 | 培养液秋水仙素肝素 |
仪器、耗材 | 棉球离心管镊子采血针吸管 |
实验步骤 | 1. 培养液准备 取15ml培养瓶数个,每瓶内分别充入5ml培养液(pH7.2),内含 1640培养液(含10%~15%小牛血清) PHA0.1ml 青霉素100单位和链霉素100μg/ml培养液 2. 抽血针管准备 取2~5ml针管一支,在消毒后的无菌操作台或无菌操作箱中安装好注射器,无菌抽肝素(100U/mlBBS)少许湿润针管,如动作迅速不用肝素亦可; 3. 采血 用棉签沾75%酒精给患者或献血者的皮肤消毒两次(勿用碘酒!),缚止血带,静脉取血1~2ml,无菌操作迅速向每一瓶培养中加血0.4~0.5ml;如系外出采血,安装针管及分装血液两步骤亦可在无菌条件略差的环境内操作,但动作要迅速,以减少污染;在采血量不多或不应抽血的情况下,亦可在耳垂、手指肚(无名指)用刺血针采血; 4. 培养和加秋水仙素 37℃温箱中培养到第60~72小时之间,此时细胞分裂相最多,向每培养瓶内加秋水仙素,最终浓度0.02~0.08μg/ml营养液,再培养4~6小时; 5. 低渗 1000转/分钟,离心10分钟后,吸除上清液,加入预温过的0.075MKCl溶液10ml,置温箱中低渗处理15~20分钟; 6. 其余步骤与处理传代细胞法相同。 ![]() |
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