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培养细胞染色体显示法实验一人末梢血微量全血培养染色体显示法
蚂蚁淘
/发布时间:1533519953 /浏览量:96
| 实验方法原理 | 显示人染色体过去主要取骨髓培养，利用其中干细胞能进行增殖显示染色体。末梢血淋巴细胞是已发生分化、处于功能态（G0期）和无分裂活动的细胞。 但在PHA的诱导下，T淋巴细胞可重新进入增殖态发生细胞分裂。 为获得淋巴细胞可用多量血分离（10ml）和微量全血培养两种方法。 多量血法较繁锁已少用，用微量全血培养法效果与多量血相同。每次从被检者静脉或指尖、耳垂等处仅采少量血（0.5ml～2ml），即可够做数个样品的培养，从而极大简化了观察人染色体的方法。 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 培养液秋水仙素肝素 仪器、耗材 | 棉球离心管镊子采血针吸管
实验步骤 | 1. 培养液准备 取15ml培养瓶数个，每瓶内分别充入5ml培养液（pH7.2），内含 1640培养液（含10%～15%小牛血清） PHA0.1ml 青霉素100单位和链霉素100μg/ml培养液 2. 抽血针管准备 取2～5ml针管一支，在消毒后的无菌操作台或无菌操作箱中安装好注射器，无菌抽肝素（100U/mlBBS）少许湿润针管，如动作迅速不用肝素亦可； 3. 采血 用棉签沾75%酒精给患者或献血者的皮肤消毒两次（勿用碘酒！），缚止血带，静脉取血1～2ml，无菌操作迅速向每一瓶培养中加血0.4～0.5ml；如系外出采血，安装针管及分装血液两步骤亦可在无菌条件略差的环境内操作，但动作要迅速，以减少污染；在采血量不多或不应抽血的情况下，亦可在耳垂、手指肚（无名指）用刺血针采血； 4. 培养和加秋水仙素 37℃温箱中培养到第60～72小时之间，此时细胞分裂相最多，向每培养瓶内加秋水仙素，最终浓度0.02～0.08μg/ml营养液，再培养4～6小时； 5. 低渗 1000转/分钟，离心10分钟后，吸除上清液，加入预温过的0.075MKCl溶液10ml，置温箱中低渗处理15～20分钟； 6. 其余步骤与处理传代细胞法相同。 
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