一、固定

1.按照第一章例2的方法进行全身灌注，但换用甲醛盐水（在0.85%盐水中含4%甲醛).3

2.取脑，储存于新鲜的甲醛盐水中。

3.用单面刹刀手工切约2mm厚的冠状切片。

二、脱水和包理

1.梯度乙醇脱水（70%、95%和100%)，每4h换3次，在组织清洁剂（nationaldiagnostics)中每4h换3次，或直至透明。

2.浸入融化的石蜡（55X：)中，每8h换3次进行包埋。

三、切片和染色

1.切10um的切片。

2.用组织清洁剂去除蜡，切片经梯度乙醇水化（100%、95%和70%)。

3.染色（注意本例中不同的切片分别用了几种不同的染色方法)。

尼氏颗较

（1）最原始的尼氏染色非常具有退行性，也就是说，组织先被过度染色然后分色，退行的技术仍然是许多现代方法的特征；

（2）用0.1%的醋酸焦油紫染色20s(染色的时间取决于染料的来源、溶液的存放时间和pH、组织的存放时间和其他可能的因素）；

（3）梯度乙醇脱水（7〇%、％%和100%),用组织清洁剂使其透明；

（4）用95%乙醇分色以降低背景染色；

（5）100%乙醇脱水完成，切片再用组织清洁剂透明。如需要，可以重复步骤c。

髓鞘（Kieman1984b)

（1）用铬花青R染色15~20min[0.21mol/L含水氯化铁20ml(5.6%w/wFeCl3.6H20);格花青Rig;H2SO4(95%~98%w/w)2.5ml;力口水至500ml];

（2）流水去除多余的染料；

（3）氯化铁（5.6%)分色；

（4）流水洗5min;

（5）可用0.5%核红衬染尼氏颗粒；

（6）梯度乙醇脱水（70%、95%和100%),用组织清洁剂透明。

4.用DPX封片。

四、结果

用醋酸焦油紫染色后，神经元的核周体和近侧树突布满略带紫色的尼氏颗粒，神经元的常染色质核未着色，但每个神经元中单个突出的核仁染色较深。胶质细胞、室管膜和内皮细胞的异染色质核染色深，密度约与染色质浓缩的程度成正比。铬花青R染色后，髓鞘呈深蓝色，神经纤维网呈灰色背景。坏死的细胞和红血球染色较深，因此，充分的灌注固定对于染色结果至关重要。