“PVDF膜荧光背景高于NC膜而不适合做荧光WB”似乎是大家的共识。从这个图片右侧的三列数据来看，确实如此，虽然质量不同，但PVDF似乎就是比NC膜荧光背景明显地高。难道高载量和低荧光背景不可兼得吗？低丰度蛋白的荧光检测有没有更好的解决方法？很长时间以来这确实是个问题。

直到……直到Millipore的Immobilon®-FL荧光检测专用PVDF上市（请见图中最左侧一列）。

为什么Immobilon®-FL转印膜

具有优异的性能？

这种0.45μm膜是最早被设计用于荧光WB检测的转印膜。自身超低荧光背景保证了在任何荧光检测中，这种膜都能通过降低背景而提高检测的灵敏度。

• 是市售产品中唯一可用于近红外波长（700-800nm）范围检测的转印膜

• 蛋白载量更大、吸附力更好带来更强的反应信号

• 背景极低，用于检测低丰度样品时优势更加显著

• 很好的韧性便于多次杂交操作
  

截至2011年初，关于Immobilon®-FL的引用文献已超过9,000多篇

除了转印膜对信噪比至关重要以外，封闭剂的选择对于荧光检测也有直接的影响。实验室中比较常用的脱脂奶（NFDM）和BSA，不仅有批间差带来的数据不稳定、磷酸化检测干扰等问题以外，在荧光检测中，NFDM和BSA也不同程度地造成了广泛的高背景问题，给最后数据呈现造成遗憾。

Millipore以非蛋白类的封闭剂完美地解决了这个令人挠头的问题。Bløk®封闭剂是一类化学小分子溶液，可以在转印膜上形成均匀而薄的一层，封闭效果稳定而又不对检测造成任何干扰。 Bløk®-FL是其中专用于荧光检测的一款。

Bløk®-FL小分子封闭剂是

如何改善实验结果的？

封闭印迹膜上所有非特异性结合位点对于避免高背景至关重要。蛋白类的封闭剂，如脱脂奶，覆盖在膜表面，本身会与抗体发生非特异性结合。而且由于蛋白降解、微生物污染等容易使这些封闭剂变质，而造成性能不稳定。Bløk®-FL这样的无蛋白化学试剂作为封闭剂不会像牛奶一样在膜表面形成厚而粘稠的一层，对降低背景非常有效。

• 荧光Western检测专用优化配方，显著降低背景

• 即用型试剂，方便直接取用

• 室温下稳定达2年

• 膜经荧光检测后还可以继续用于染色

Bløk®-FL保证最好的信噪比
经系列稀释的EGF刺激的A431细胞的裂解液样品上样（2-0.5μg/道），两个Immobilon®-FL印迹膜采用图示的封闭剂封闭，抗体检测：(A)1:10,000,anti-GAPDH抗体（目录号MAB374）；(B)1:2,000anti-Actin抗体（目录号MAB1501），采用图示的封闭剂稀释抗体。二抗采用抗小鼠IgG抗体(A)IRDye680或(B)IRDye800，真空干燥1小时后用Odyssey®扫描仪（LI-COR）扫描。

相信Immobilon®-FL转印膜和Bløk®-FL小分子封闭剂双剑合璧，一定能大幅度改善荧光WB数据呈现。
助您新的一年实验更上一层楼！