摘要： 目的对马凡综合征(Marfan syndrome,MFS)患者和晶状体脱位综合征(Ectopia lentis syndrome,ELS)患者的原纤维蛋白-1(fibrillin-1,FBN1)基因,转化生长因子受体1(Transforming Growth Factor Beta Receptor TypeⅠ,TGFBR1)和转化生长因子受体2(Transforming Growth Factor Beta Receptor TypeⅡ,TGFBR2)进行基因突变筛查,有利于明确相应患者的患病原因,并可为家系成员的症状前检测或下一代的产前筛查提供依据.方法1.NGS和MLPA技术在MFS和ELS基因诊断中的应用提取22例MFS患者和1例ELS患者的基因组DNA,用第二代测序技术(Next generation sequencing,NGS)对FBN1,TGFBR1和TGFBR2进行突变筛查,然后用Sanger测序对突变位点进行验证,对NGS未发现突变的病人,再应用多重连接探针扩增技术(Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification,MLPA)检测FBN1,TGFBR1和TGFBR2是否存在大片段缺失/重复突变,对这两种方法提示有基因组大片段突变的外显子进行PCR和DNA Sanger测序以证实突变.2.一个FBN1纯合突变家系的分析提取该先证者和该家系成员外周血全基因组DNA,用NGS技术对先证者FBN1进行突变筛查,然后用Sanger测序对突变位点进行验证并对家系成员进行突变位点的Sanger测序.提取先证者主动脉组织的RNA,用RT-PCR扩增突变所在外显子,并进行Sanger测序.结果1.NGS和MLPA技术在MFS和ELS基因诊断中的应用在22例MFS和1例ELS患者(18号患者)中发现20种FBN1突变,其中20种突变中有13个是错义突变,3个是无义突变,2个剪接位点突变,1个移码突变,1个是大片段缺失突变.20种突变中有11种为未报道过的突变,分别是c.448TC,c.1665CA,deletion of exon18,c.3082+2TC,c.3521TC,c.4081TG,c.5517CA,c.6864_6871+1deletion CTGTGTAGG,c.6992GA,c.7594del A,和c.7713TG;9种为已报道的突变,分别是c.199TC,c.640GA,c.1585CT,c.2413TC,c.3037GA,c.3380GT,c.5497TC,c.6424TC和c.6451TC.而一例大片段缺失突变患者经MLPA及长片段PCR测序证实具体突变为c.2114-2357_2167+747del3158bp.未发现TGFBR1和TGFBR2的突变.2.一个FBN1纯合突变家系的分析该先证者和其兄FBN1第61号内含子均存在纯合的剪接位点突变(c.7570+5GA),其双亲及其女儿均存在同一位点的杂合突变.经调查其双亲为表兄妹近亲结婚.先证者组织RNA经RT-PCR和Sanger测序发现FBN1缺失整个61号外显子.结论1,FBN1基因突变可能是这19例MFS患者和1例ELS患者的致病因素.2,FBN1剪接位点突变(c.7570+5GA)很可能是纯合MFS家系的致病原因. 展开 我们已与文献出版商建立了直接购买合作。 你可以通过身份认证进行实名认证，认证成功后本次下载的费用将由您所在的图书馆支付 您可以直接购买此文献，1~5分钟即可下载全文，部分资源由于网络原因可能需要更长时间，请您耐心等待哦~