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Yeast Smash & Grab DNA Miniprep
basedonM.D.Rose,F.Winston,andP.Hieter(1990)MethodsinYeastGenetics:ALaboratoryCourseManual.ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NewYork.
1.TocellpelletinEppendorftube,add0.3g(roughly0.3ml)ofglassbeads,0.2mloflysisbufferand0.2mlofa1:1mixofphenolandchloroform.
2.Vortexthetubeattopspeedfor2min.
3.Add0.2mlofTE(10mMTris,1mMEDTA,pH8.0)andvortexagainforafewseconds.
4.Spinthetubesfor5min(roomtemperature)attopspeedinanEppendorfcentrifuge.
5.Transfertheaqueous(upper)phase(0.38ml)toafreshEppendorftube,usinganewPipettetipforeachsample.Discardthetubewiththeglassbeads.
6.Add2volumesof100%ethanolatroomtemperature.Mixthoroughly.
7.CentrifugeinEppendorffor2-3minatroomtemperature.
8.Discardthesupernatant(usetheaspirator;takecarenottodislodgethepellet).
9.Rinsethepelletwith0.5mlofcold,70%ethanoladdtheethanolslowlydownthesideofthetube,thencentrifugefor3-5sec.
10.Removethesupernatant.Leavethetubesopenandinvertedforthepelletstodry.(Ordrythepelletsundervacuum.)
Glassbeads
Use425-600micronbeads.SigmaG-9268workswellforus.Topreparethebeads:
- Pourthebeads(1kgbottle)intoa2litrebeaker.
- FillthebeakerwithconcentratedHCluntilthebeadsarefullysubmerged.Letstandinafumehoodfor15min.
- Washwithtap-distilledwateruntilthepHisneutral.Ithelpstorunthewaterthroughglasstubingjammedtothebottomofthebeakersothatthewaterflowsupfromthebottomofthebeaker.
- Transferthebeadstoabakingdishandbake(overnightisgood).
- Pourthebeadsintoasterilebottle.
Lysisbuffer:
- 10mMTris,pH8.0
- 1mMEDTA
- 100mMNaCl
- 1%SDS
- 2%TritonX-100
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